Пробоподготовка биологических жидкостей

Анализ проб биологических жидкостей находит широкое применение в биохимии при исследовании содержания и распределения известных и разрабатываемых лекарственных препаратов и их метаболитов, в спортивной медицине при проведении допинг-тестов, в криминалистике, в клинико-терапевтической практике при выявлении биохимических маркеров различных заболеваний и во многих других областях.

Традиционным рутинным методам выделения и очистки соединений из биологических жидкостей: осаждению белков с последующим центрифугированием, жидкостной экстракции, сорбционному разделению высокомолекулярных и низкомолекулярных соединений, фирма Biotage предлагает эффективную замену - высокопроизводительные и воспроизводимые методы с использованием специальных технологий в формате плашек.

Осаждение белков на плашках ISOLUTE PPT+

Установленные в плашки картриджи с оптимизированными характеристиками фильтрующих элементов обеспечивают удерживание растворителя до нанесения плазмы и обеспечивают эффективную фильтрацию образца через осажденный белок.

Обратная традиционно принятой последовательность введения реагентов (вначале растворитель, осаждающий белки, затем плазма) увеличивает степень очистки низкомолекулярных соединений от белков и не требует перемешивания. Время подготовки пробы уменьшается в три раза.

Жидкостная экстракция в нанесенном слое

Процесс жидкостной экстракции проводится в колонках, заполненных инертным носителем (модифицированная диатомитовая земля). Проба, растворенная в воде, распределяется на поверхности частиц носителя в виде тонкой пленки, что увеличивает поверхность контакта с экстрагентом не смешивающимся с водой органическим растворителем /Supported liquid extraction (SLE)/. Растворитель, пропускаемый через патрон, эффективно извлекает целевой компонент без образования эмульсии. Процесс реализуется как в формате 96-луночных плашек ISOLUTE SLE+, так и в формате колонок ISOLUTE HM-N (от 300 мкл до 20 мл образца).

Такая процедура позволяет:

увеличить производительность и автоматизировать процесс;
увеличить степень извлечения по сравнению с традиционной жидкостной экстракцией;
повысить отношение сигнал/шум при использовании масс-селективного детектора;

Сорбционная экстракция на патронах EVOLUTE ABN

Патроны EVOLUTE ABN специально разработаны для эффективной экстракции кислых (Acidic), основных (Basic) и нейтральных (Neutral) лекарственных препаратов из биологических жидкостей. Комбинация полярных и гидрофобных групп на поверхности полимерного сорбента оптимизирована как для смачивания его водой, так и для достаточного удерживания лекарственных препаратов различной природы. Пористая структура сорбента (около 40 А) в сочетании с узким распределением пор по размеру обеспечивает доступность внутренней поверхности сорбента для низкомолекулярных соединений, при этом внешняя поверхность не удерживает белки (см.схему).

Общий метод обработки плазмы в формате патрона с 25 мг сорбента (содержание целевого компонента 5-50 нг/мл):

разбавить образец 1 % муравьиной кислотой 1:3;
промыть колонку 1 мл метанола; уравновесить 1 % муравьиной кислотой (1 мл);
нанести 400 мкл 2 мл разбавленной плазмы;
промыть 1 мл смеси вода/метанол (95:5 v/v);
элюировать целевые компоненты 500 мкл метанола

Установлено, что EVOLUTE ABN позволяет извлекать более 80% лекарственных препаратов основной, кислотной и нейтральной химической природы. Универсальность характеристик этого сорбента заметно отличает его от аналогов.